El laboratorio de microbiología convierte una muestra en una identificación y en un informe de susceptibilidad. Cada paso —recolección, transporte, siembra, incubación, lectura, identificación, susceptibilidad e informe— puede invalidar el siguiente. El tecnólogo médico decide si una muestra es adecuada, qué medios sembrar, qué atmósfera usar y cuándo un aislamiento representa flora colonizante y no una infección.
La calidad de la muestra manda: un esputo con abundantes células epiteliales escamosas y pocos leucocitos refleja saliva y debe rechazarse; un hemocultivo depende del volumen de sangre y de la antisepsia de la piel; la orina para urocultivo se siembra con asa calibrada y el recuento se obtiene multiplicando las colonias por el inverso del volumen del asa. La tinción de Gram orienta desde el primer minuto y su lectura debe cotejarse con el crecimiento: una discordancia entre Gram y cultivo es una alerta, no un detalle. Los medios se eligen por su función: no selectivos para recuperación amplia, selectivos y diferenciales para separar poblaciones, y enriquecidos para microorganismos exigentes; la atmósfera con dióxido de carbono, la anaerobiosis y la temperatura completan el diseño.
La identificación bioquímica clásica se apoya en catalasa, coagulasa, oxidasa, hemólisis, fermentación de carbohidratos, producción de indol, ureasa y descarboxilasas, hoy complementadas o sustituidas por sistemas automatizados y por espectrometría de masas. Las pruebas de susceptibilidad se interpretan con los puntos de corte del documento de consenso vigente del CLSI, que se actualiza periódicamente: informar con una tabla vencida es un error de calidad. La difusión en disco exige inóculo estandarizado por turbidez, profundidad de agar controlada y lectura del halo por el borde de inhibición completa; la microdilución entrega la concentración inhibitoria mínima. Los mecanismos de resistencia que obligan a modificar el informe —betalactamasas de espectro extendido, resistencia inducible a clindamicina detectada por la prueba de aproximación de discos, resistencia a meticilina mediada por el gen mecA— forman parte del razonamiento diario.
El examen de heces para parásitos combina concentración y tinción permanente; la conservación en fijador adecuado y el número de muestras seriadas determinan la sensibilidad. La identificación se basa en morfología: tamaño, número de núcleos, cariosoma, cromatina periférica y presencia de cuerpos cromatoidales en protozoos; forma, tamaño, opérculo, espina y contenido en helmintos. En micología, la observación directa con hidróxido de potasio, el cultivo en medios con y sin cicloheximida y la temperatura de incubación separan dermatofitos, levaduras y hongos dimórficos; el manejo de mohos exige cabina de bioseguridad por el riesgo de aerosoles de conidios.
Fuentes de referencia: documentos de consenso CLSI para pruebas de susceptibilidad y para recolección y transporte; guías del CDC y el manual BMBL para bioseguridad; requisitos de CLIA para pruebas de alta complejidad. Los puntos de corte concretos cambian con cada edición y deben consultarse en la tabla vigente del laboratorio.
1. ¿Qué hallazgo microscópico indica que una muestra de esputo procede en realidad de saliva?
El criterio de aceptabilidad se basa en la proporción entre células escamosas y leucocitos: muchas escamosas indican contaminación con secreción de la vía superior y la muestra debe rechazarse con petición de otra. Fuente: documentos de consenso CLSI sobre recolección y transporte de muestras microbiológicas.
2. ¿Qué factor influye más en la sensibilidad de un hemocultivo en el paciente adulto?
El volumen de sangre es la variable con mayor efecto sobre la recuperación de microorganismos, seguida del número de conjuntos y de la antisepsia de la piel. Fuente: documentos de consenso CLSI sobre hemocultivos.
3. ¿Por qué la antisepsia cuidadosa de la piel es crítica antes de un hemocultivo?
La contaminación por flora cutánea es la principal causa de hemocultivos falsamente positivos, con consecuencias asistenciales y de costo. La técnica antiséptica y el tiempo de secado forman parte del procedimiento. Fuente: documentos de consenso CLSI sobre hemocultivos.
4. Una muestra para cultivo de anaerobios llega en hisopo seco y sin medio de transporte. ¿Cuál es la conducta correcta?
Los anaerobios estrictos mueren con rapidez ante el oxígeno; una muestra sin sistema de transporte adecuado no permite descartar su presencia y debe rechazarse con explicación al servicio solicitante. Fuente: documentos de consenso CLSI sobre recolección y transporte.
5. ¿Por qué un hisopo de herida superficial tiene valor limitado?
La muestra de elección en infección profunda es el tejido o el aspirado; el hisopo superficial recupera colonizantes y dificulta la interpretación. Fuente: documentos de consenso CLSI sobre recolección de muestras de herida.
6. ¿Cuál es el orden correcto de los reactivos en la tinción de Gram?
El cristal violeta tiñe todas las células, el lugol actúa como mordiente formando el complejo, el decolorante retira ese complejo de las paredes finas y la safranina tiñe lo decolorado. Fuente: documentos de consenso CLSI sobre tinciones microbiológicas.
7. ¿Qué ocurre si se prolonga en exceso el paso de decoloración en la tinción de Gram?
El exceso de decoloración retira el complejo también de las paredes gruesas y produce grampositivos falsamente gramnegativos; el control de tinción con cepas conocidas detecta el problema. Fuente: documentos de consenso CLSI sobre tinciones y control de calidad.
8. ¿Qué diferencia estructural explica el comportamiento en la tinción de Gram?
La pared gruesa de peptidoglucano retiene el complejo cristal violeta-yodo, mientras la pared fina con membrana externa lo pierde durante la decoloración. Fuente: textos de referencia de microbiología y documentos CLSI.
9. ¿Por qué debe procesarse un control de tinción con cada lote de reactivos de Gram?
El control con una cepa grampositiva y otra gramnegativa conocidas verifica el desempeño de los reactivos; es un requisito documentado del control de calidad microbiológico. Fuente: requisitos de CLIA y documentos de consenso CLSI.
10. La tinción de Gram muestra cocos grampositivos en cadenas pero el cultivo no crece a las 24 horas. ¿Qué hipótesis debe explorarse?
La discordancia entre Gram y cultivo es una alerta que obliga a revisar el tratamiento previo, la idoneidad de los medios y la atmósfera, y a prolongar la incubación si procede. Fuente: documentos de consenso CLSI sobre correlación entre tinción y cultivo.
11. ¿Qué distingue un medio selectivo de uno diferencial?
La selectividad procede de agentes inhibidores y la diferenciación de indicadores que revelan una propiedad metabólica; un mismo medio puede reunir ambas características. Fuente: textos de referencia de microbiología y documentos CLSI.
12. ¿Qué propiedad convierte al agar MacConkey en un medio a la vez selectivo y diferencial?
Las sales biliares y el cristal violeta inhiben los grampositivos, mientras la lactosa y el indicador de pH separan a los fermentadores de los no fermentadores. Fuente: textos de referencia de microbiología y documentos de consenso CLSI.
13. ¿Por qué el agar chocolate permite el crecimiento de microorganismos exigentes que no crecen en agar sangre?
Al calentar la sangre se lisan los eritrocitos y quedan disponibles factores que algunos microorganismos no pueden obtener del agar sangre intacto. Fuente: textos de referencia de microbiología y documentos CLSI.
14. ¿Qué control de calidad exige cada lote nuevo de medios de cultivo preparados?
El control de medios incluye esterilidad, aspecto, pH cuando procede y desempeño frente a cepas de referencia que deben crecer o quedar inhibidas según el diseño del medio. Fuente: requisitos de CLIA y documentos de consenso CLSI sobre control de calidad microbiológico.
15. ¿Qué atmósfera requiere el cultivo de microorganismos capnófilos?
Los capnófilos requieren dióxido de carbono adicional, que se consigue con incubadora, jarra con generador o bolsa. La anaerobiosis estricta corresponde a otro grupo de microorganismos. Fuente: textos de referencia de microbiología y documentos CLSI.
16. Con un asa calibrada de 0,001 mL se siembran 85 colonias en la placa. ¿Cuál es el recuento por mililitro?
El asa de 0,001 mL exige multiplicar por mil: 85 por 1 000 da 85 000 unidades formadoras de colonia por mililitro. Fuente: documentos de consenso CLSI sobre urocultivo cuantitativo.
17. Con un asa calibrada de 0,01 mL se cuentan 120 colonias. ¿Cuál es el recuento por mililitro?
El asa de 0,01 mL exige multiplicar por cien: 120 por 100 da 12 000 unidades formadoras de colonia por mililitro. El factor depende del volumen del asa empleada y se declara en el procedimiento. Fuente: documentos de consenso CLSI sobre urocultivo.
18. Un urocultivo desarrolla tres morfotipos distintos en recuentos bajos. ¿Cómo debe interpretarse?
El crecimiento de varios morfotipos en recuento bajo sugiere contaminación por flora perineal; el laboratorio aplica su criterio escrito, informa la sospecha y solicita nueva muestra bien recogida. Fuente: documentos de consenso CLSI sobre interpretación del urocultivo.
19. ¿Qué separa la prueba de catalasa dentro de los cocos grampositivos?
La catalasa descompone el peróxido de hidrógeno con producción visible de burbujas; es positiva en estafilococos y micrococos, y negativa en estreptococos y enterococos. Fuente: textos de referencia de microbiología y documentos CLSI.
20. ¿Qué prueba distingue de forma clásica a Staphylococcus aureus dentro de su género?
La coagulasa es el marcador clásico de Staphylococcus aureus; la catalasa es positiva en todo el género y la oxidasa es negativa. Fuente: textos de referencia de microbiología y documentos de consenso CLSI.
21. ¿Qué prueba se emplea de forma clásica para orientar la identificación de Streptococcus pneumoniae?
El neumococo es sensible a optoquina y soluble en bilis, dos rasgos que lo separan de otros estreptococos alfa hemolíticos. La bacitracina y la prueba de CAMP orientan a otros grupos. Fuente: textos de referencia de microbiología y documentos CLSI.
22. ¿Qué combinación de pruebas orienta hacia Enterococcus frente a otros cocos grampositivos?
La combinación de esculina con bilis y tolerancia a la sal es el patrón clásico del género Enterococcus. Las demás combinaciones corresponden a neumococo, estafilococo y estreptococo del grupo B. Fuente: textos de referencia de microbiología y documentos CLSI.
23. ¿Qué indica una prueba de oxidasa positiva en un bacilo gramnegativo?
La oxidasa es una prueba de cribado rápida: los Enterobacterales son característicamente negativos, mientras Pseudomonas, Aeromonas, Vibrio y Campylobacter son positivos. Fuente: textos de referencia de microbiología y documentos CLSI.
24. ¿Qué información aporta un medio de hierro con tres azúcares en la identificación de enterobacterias?
El medio inclinado con tres azúcares informa a la vez de la fermentación en pico y fondo, de la producción de gas y del ennegrecimiento por sulfhídrico. Las demás pruebas se realizan en medios distintos. Fuente: textos de referencia de microbiología y documentos CLSI.
25. ¿Qué microorganismo se sospecha ante un bacilo gramnegativo con ureasa intensamente positiva y movilidad en enjambre sobre agar sangre?
La combinación de ureasa rápida y crecimiento en enjambre es característica del género Proteus, y su expansión sobre la placa puede enmascarar otros aislamientos. Fuente: textos de referencia de microbiología y documentos CLSI.
26. ¿Qué ventaja aporta la espectrometría de masas de tipo MALDI en la identificación bacteriana?
La técnica compara el perfil de proteínas ribosómicas del aislamiento con una base de datos y entrega identificación en minutos; la sensibilidad sigue requiriendo pruebas específicas y el sistema exige control de calidad. Fuente: documentos de consenso CLSI sobre identificación microbiana.
27. ¿Por qué el inóculo de una prueba de difusión en disco debe ajustarse a una turbidez definida?
El tamaño del halo depende de la densidad del inóculo: un inóculo excesivo reduce los diámetros y puede clasificar como resistente un aislamiento sensible. Fuente: documentos de consenso CLSI sobre pruebas de susceptibilidad antimicrobiana.
28. ¿Qué efecto tiene un agar de profundidad excesiva en la difusión en disco?
El espesor del agar debe mantenerse dentro del intervalo especificado; un agar demasiado grueso reduce los diámetros y uno demasiado fino los aumenta. Fuente: documentos de consenso CLSI sobre difusión en disco.
29. ¿Qué representa la concentración inhibitoria mínima obtenida por microdilución?
La concentración inhibitoria mínima es un valor de laboratorio que se interpreta con los puntos de corte vigentes; no equivale a una recomendación de dosis, que corresponde al médico. Fuente: documentos de consenso CLSI sobre pruebas de susceptibilidad.
30. ¿Por qué los puntos de corte deben consultarse en la edición vigente del documento de consenso?
Los puntos de corte se actualizan conforme cambian los datos de resistencia y de exposición; informar con una tabla vencida es un defecto de calidad detectable en una inspección. Fuente: documentos de consenso CLSI sobre susceptibilidad antimicrobiana.
31. ¿Qué detecta la prueba de aproximación de discos conocida como prueba D?
El achatamiento del halo de clindamicina junto al disco de eritromicina revela un mecanismo inducible que haría fallar el tratamiento; el informe debe modificarse en consecuencia. Fuente: documentos de consenso CLSI sobre pruebas de susceptibilidad.
32. ¿Qué implica detectar resistencia a meticilina en un estafilococo?
El mecanismo mediado por una proteína fijadora alterada confiere resistencia a la clase betalactámica en su conjunto, con las excepciones expresamente reconocidas; el informe debe reflejarlo. Fuente: documentos de consenso CLSI sobre reglas de informe.
33. ¿Qué finalidad tiene procesar cepas de referencia en el antibiograma diario?
Las cepas de referencia tienen intervalos de diámetro o de concentración inhibitoria publicados; su resultado diario o semanal valida el desempeño del sistema. Fuente: requisitos de CLIA y documentos de consenso CLSI.
34. ¿Qué es un informe acumulado de sensibilidad y para qué sirve?
El informe acumulado se elabora con el primer aislamiento por paciente y período, y sirve para orientar la terapia empírica y vigilar tendencias de resistencia. Fuente: documentos de consenso CLSI sobre informes acumulados de sensibilidad.
35. ¿Qué principio sustenta la tinción para bacilos ácido alcohol resistentes?
El alto contenido en ácidos micólicos impide la decoloración con alcohol ácido, lo que define el carácter ácido alcohol resistente. La variante fluorescente emplea fluorocromos, no fluorescencia natural. Fuente: documentos de consenso CLSI sobre tinciones para micobacterias.